GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI

GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI

Detail produk:

Tempat asal: Cina
Nama merek: GDSBio
Sertifikasi: ISO9001, ISO13485
Nomor model: KM004-A, KM004-B

Syarat-syarat pembayaran & pengiriman:

Kuantitas min Order: 1 kotak
Kemasan rincian: paket kecil atau mendistribusikan massal atau OEM
Waktu pengiriman: 8 hari kerja
Syarat-syarat pembayaran: L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram
Menyediakan kemampuan: 10000 Kotak/Kotak per Hari
Harga terbaik Kontak

Informasi Detail

Kucing. TIDAK.: KM004-A, KM004-B Spesifikasi: KM004-A/24 rxns; KM004-B/96 rxns
Penampilan: cairan bening Saham: Ya
Pencetakan Logo: Dengan Pencetakan Logo Paket Transportasi: Sedang mengemas
Kehidupan Rak: 12 bulan Kondisi penyimpanan: Simpan pada suhu kamar (15-25°C) dan transportasi pada suhu kamar.
Cahaya Tinggi:

Kit Ekstraksi Asam Nukleat Virus RNA

,

Kit Ekstraksi Asam Nukleat Viral DNA

,

kit ekstraksi swab rna

Deskripsi Produk

Perpustakaan DNA CepatPlusKit Persiapanuntuk MGI

[Nama Produk]

Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI

[Kucing.No./Spesifikasi]

KM004-A/24 rxns;KM004-B/96 rxns;karung sampel / 6 rxns

[Deskripsi Produk]

Bertujuan untuk platform pengurutan throughput tinggi MGI, kit ini menyediakan skema konstruksi perpustakaan DNA yang nyaman dan universal dalam satu tabung.Ini menggabungkan fragmentasi, perbaikan akhir dan A-Tailing menjadi satu langkah, sangat mempersingkat waktu pembangunan perpustakaan dan mengurangi kesalahan yang disebabkan oleh langkah-langkah yang membosankan.Setelah fragmentasi dan preparasi akhir, produk dapat langsung diligasi dengan adaptor tanpa pemurnian tambahan, dan prosedur selanjutnya sama dengan #KM001 Fast DNA Library Prep Kit untuk MGI.Kuantifikasi perpustakaan lengkap dapat dilakukan dengan metode pewarna fluoresen dsDNA (misalnya, Thermo Qubit Flex Fluorometer) atau PCR kuantifikasi absolut setelah mengencerkan perpustakaan ke konsentrasi yang sesuai.

[Jenis Sampel]

Tabel 1 Input yang Direkomendasikan untuk DNA Biasa

Aplikasi Jenis Sampel Jumlah yang Direkomendasikan
Pengurutan seluruh genom Genom kompleks berkualitas tinggi 50ng-1μg
Pengurutan tangkapan target seluruh exome Genom kompleks berkualitas tinggi 10ng-1μg
Pengurutan penangkapan target seluruh genom DNA FFPE ≥50ng
Pengurutan seluruh genom Genom mikroba 1ng-1μg

[Kondisi Penyimpanan & Umur Simpan]

Semua reagen harus disimpan pada suhu -20°C.Penyangga ligasi normal untuk kristal mengendap pada suhu rendah, itu harus seimbang dengan suhu kamar sebelum digunakan.Produk ini berlaku selama 12 bulan.

[Komponen]

Komponen 24 rxn 96 rxns
Penyangga FEP 120 μl 480 μl
Campuran Enzim FEP 240 μl 2×480 ul
Ligase DNA cepat 120 μl 2×240μl
Penyangga Ligasi Cepat 600 μl 4×600μl
2× Campuran Master PCR Perpustakaan HIFI 600 μl 4×600μl
Campuran Primer untuk MGI * 120 μl 480 μl
Penyangga Netralisasi 120 μl 480 μl

*FEP Buffer adalah buffer reaksi fragmentasi dan persiapan akhir.FEP Enzyme Mix adalah campuran enzim yang berhubungan dengan fragmentasi dan preparasi akhir.

* Jika ada lebih dari satu sampel, campuran primer adaptor #KM002 dan #KM003 direkomendasikan.Kit ini menyediakan satu set primer, urutan primer adalah sebagai berikut:

5'-TGTGAGCCAAGGAGTTG-3'

5'-GAACGACATGGCTACGA-3'

Catatan: manik-manik pilihan yang disarankan: #NC1011 GDSPure DNA Selection Magbeads atau manik-manik AMPure XP.

[Catatan]

1. Kami menawarkan dua jenis set primer Adaptor Universal (Adaptor GDS, #KM002 dan #KM003, dibeli terpisah), tetapi pelanggan juga dapat memilih dari produsen lain atau mensintesis Adaptor mereka sendiri untuk platform pengurutan MGI.Terlalu banyak Adaptor akan menyebabkan pembentukan dimer Adaptor, dan Adaptor yang tidak mencukupi akan menyebabkan output perpustakaan yang rendah.Oleh karena itu, konsentrasi Adaptor yang tepat menentukan konsentrasi dan kualitas perpustakaan.Konsentrasi adaptor yang direkomendasikan untuk jumlah input DNA yang berbeda ditunjukkan pada tabel berikut:

Tabel 2 Rekomendasi Penggunaan Konsentrasi Adaptor

Masukan DNA Konsentrat yang Direkomendasikanuntuk Adaptor Adaptor: Masukkan Rasio Mol Derajat Pengenceran Adaptor GDS*
1μg 10μM 10:1 Tidak ada pengenceran
500 ng 10μM 20:1 Tidak ada pengenceran
250 ng 10μM 40:1 Tidak ada pengenceran
100 ng 7,5μM 100:1 3:4
50 ng 5μM 200:1 1:2
25ng 2,5μM 200:1 1:4
1ng 1μM 200:1 1:10

* Dinyatakan sebagai rasio volume adaptor terhadap pengencer

2. Enzim yang digunakan dalam 2× HIFI Library PCR Master Mix adalah DNA polimerase keluarga B, yang memiliki aktivitas eksonuklease 5 '-3' polimerase dan 3 '-5', tetapi tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5 '-3'.Ini memiliki kesetiaan dan homogenitas yang tinggi, dan kemampuan sintesis berkelanjutan yang kuat.Kontrol ketat jumlah siklus amplifikasi sangat penting untuk output perpustakaan.Tabel berikut menunjukkan jumlah siklus amplifikasi yang direkomendasikan sesuai dengan jumlah masukan DNA yang berbeda:

Tabel 3 Jumlah Siklus Amplifikasi yang Direkomendasikan Sesuai dengan Input Sampel yang Berbeda

Masukan DNA Jumlah Siklus Amplifikasi yang Disarankan
Perpustakaan 100ng Perpustakaan 1μg
1μg 0 2-5
500 ng 0 2-5
250 ng 1-3 5-7
100 ng 2-4 6-8
50 ng 4-6 8-10
25ng 5-7 9-12
10 ng 7-9 11-13
5ng 9-11 13-14
2.5ng 10-12 14-16
1ng 11-13 15-17

Catatan: 1. Tabel di atas menunjukkan hasil pengujian menggunakan DNA standar 150bp, yang hanya untuk referensi.

2. Jika konektor yang tidak lengkap digunakan, jumlah siklus minimum (1-3) harus diperkuat untuk mendapatkan perpustakaan yang lengkap.

3. Jika kualitas input DNA buruk, atau pemilihan ukuran dilakukan selama konstruksi perpustakaan, jumlah siklus amplifikasi harus ditingkatkan secara tepat.

[Proses Konstruksi Perpustakaan Standar]

Fragmentasi dan Perbaikan Akhir

1. Tentukan komposisi pelarut DNA cetakan, jika tidak ada EDTA, langsung lanjutkan ke Langkah 2;Jika EDTA terkandung, 2,2× magnetic bead harus digunakan untuk pemurnian, atau volume Penyangga Netralisasi yang sesuai harus ditambahkan sesuai dengan isi EDTA dalam tabel berikut untuk Netralisasi:

Persetujuan EDTA Volume Penyangga Netralisasi
1mM 5 μl
0,8 mM 4 μl
0,6mM 3 μl
0,5mM 2,5 mikrol
0,4mM 2 μl
0,2mM 1 μl
0,1mM 0,5 mikrol
<0,1mM 0 μl

2. Siapkan reaksi berikut dalam tabung PCR 200 μl:

Reagen Volume
Masukan DNA X μl
Penyangga FEP 5 μl
Penyangga Netralisasi Y μl
ddH2HAI Sampai 65 μl

3. Tambahkan 10 µl FEP Enzyme Mix ke dalam sistem di atas, tiup secara merata, centrifuge sebentar, dansegera dimasukkan ke dalam alat PCR untuk reaksi berikut:

Suhu Waktu
20°C 15 menit
37°C Lihat Tabel 4
65°C 15 menit
4°C

Tabel 4 Waktu Penahanan yang Diperlukan untuk Mendapatkan Pustaka dengan Ukuran Berbeda

Ukuran Fragmen Waktu
150bp 20-30 menit
250bp 15-20 menit
350bp 10-15 menit
550bp 6-10 menit

Adaptor Ligation

1. Lanjutkan dengan reaksi ligasi sesegera mungkin setelah fragmentasi dan persiapan akhir.

2. Encerkan adaptor sesuai Tabel 2.

3. Siapkan sistem reaksi berikut:

Reagen Volume
produk di atas 50 μl
Penyangga Ligasi Cepat 25 μl
Ligase DNA cepat 5 μl
Adaptor X untuk MGI 5 μl
ddH2HAI 15 μl
Total 100 μl

4. Vortex perlahan dan putar sebentar agar tercampur rata, centrifuge sebentar dan kumpulkan semua cairan ke dasar tabung.

5. Lakukan reaksi berikut dalam thermal cycler:

Suhu Waktu
20°C 15 menit
4°C

DirekomendasikanSsolusi untukPembersihan PCR/Pemilihan Ukuran(volume manik magnetik spesifik harus disesuaikan dengan sampel sebenarnyaukuran)

1. Siapkan 100 μl produk ligasi ke dalam tabung sentrifus yang sesuai.

2. Tambahkan 100 μl manik-manik magnetik seleksi DNA yang disuspensikan ke dalam sampel.Tiup perlahan dengan pipet selama 10 kali (atau vortex selama 30 detik).Inkubasi sampel selama 5 menit pada suhu kamar.

3. Tempatkan tabung pada rak magnet yang sesuai untuk memisahkan manik-manik dari supernatan.Saat larutan jernih, hati-hati keluarkan dan buang supernatan dengan pipet (jangan membuang manik-manik).

4. Tambahkan 200 μl 80% etanol yang baru disiapkan ke dalam tabung saat berada di rak magnet.Inkubasi pada suhu kamar selama 30 detik, lalu lepaskan dan buang supernatan dengan hati-hati (jangan ganggu manik-manik).

5. Ulangi Langkah 4 sekali untuk total dua kali pencucian.

Catatan: Pastikan untuk menghilangkan semua cairan yang terlihat setelah pencucian kedua.

6. Keringkan manik-manik dengan udara sampai permukaan manik-manik magnet tidak memiliki kilau yang jelas saat tabung berada di rak magnet dengan tutupnya terbuka.

Catatan: Jangan mengeringkan manik-manik secara berlebihan, hal ini dapat mengakibatkan pemulihan DNA yang lebih rendah.Saat manik-manik mulai retak, artinya terlalu kering.

7. Lepaskan tabung dari rak magnetik.Tambahkan 22 μl buffer elusi (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) ke dalam tabung.Aduk rata dengan memipetkan ke atas dan ke bawah setidaknya 10 kali atau pada vortex mixer selama 30 detik.Inkubasi selama 3-5 menit pada suhu kamar.

8. Tempatkan tabung di rak magnet.Setelah 5 menit (atau bila larutan jernih), pindahkan 20 µl supernatan ke tabung baru.Pemilihan selesai, dan DNA yang dipilih dapat digunakan untuk eksperimen selanjutnya atau disimpan pada suhu -20°C untuk waktu yang lama.

Amplifikasi Perpustakaan

1. Siapkan reaksi berikut dalam tabung PCR:

Reagen Volume
Produk ligasi setelah pembersihan atau pemilihan ukuran 20 μl
2× Campuran Master PCR Perpustakaan HIFI 25 μl
Campuran primer untuk MGI 5 μl
Total 50 μl

2. Vortex perlahan dan putar sebentar agar tercampur rata, centrifuge sebentar dan kumpulkan semua cairan ke dasar tabung.

3. Lakukan reaksi berikut dalam thermal cycler:

Suhu Waktu Nomor Siklus
95°C 3 menit 1
98°C 20 detik

 

Pilih jumlah siklus yang sesuai sesuai Tabel 3

60°C 15 detik
72°C 30 detik
72°C 5 menit 1
4°C -

DirekomendasikanSsolusi untukPembersihan PCR/Pemilihan Ukuran(volume manik magnetik spesifik harus disesuaikan dengan sampel sebenarnyaukuran)

1. Siapkan 50 μl produk ligasi ke dalam tabung sentrifus yang sesuai.

2. Tambahkan 45 μl manik-manik magnetik seleksi DNA yang disuspensikan ke dalam sampel.Tiup perlahan dengan pipet selama 10 kali (atau vortex selama 30 detik).Inkubasi sampel selama 5 menit pada suhu kamar.

3. Tempatkan tabung pada rak magnet yang sesuai untuk memisahkan manik-manik dari supernatan.Saat larutan jernih, hati-hati keluarkan dan buang supernatan dengan pipet (jangan membuang manik-manik).

4. Tambahkan 200 μl 80% etanol yang baru disiapkan ke dalam tabung saat berada di rak magnet.Inkubasi pada suhu kamar selama 30 detik, lalu lepaskan dan buang supernatan dengan hati-hati (jangan ganggu manik-manik).

5. Ulangi Langkah 4 sekali untuk total dua kali pencucian.

Catatan: Pastikan untuk menghilangkan semua cairan yang terlihat setelah pencucian kedua.

6. Keringkan manik-manik dengan udara sampai permukaan manik-manik magnet tidak memiliki kilau yang jelas saat tabung berada di rak magnet dengan tutupnya terbuka.

Catatan: Jangan mengeringkan manik-manik secara berlebihan, hal ini dapat mengakibatkan pemulihan DNA yang lebih rendah.Saat manik-manik mulai retak, artinya terlalu kering.

7. Lepaskan tabung dari rak magnetik.Tambahkan 22 μl buffer elusi (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) ke dalam tabung.Aduk rata dengan memipetkan ke atas dan ke bawah setidaknya 10 kali atau pada vortex mixer selama 30 detik.Inkubasi selama 3-5 menit pada suhu kamar.

8. Tempatkan tabung di rak magnet.Setelah 5 menit (atau bila larutan jernih), pindahkan 20 µl supernatan ke tabung baru.Pemilihan selesai, dan DNA yang dipilih dapat disimpan pada suhu 2-8°C selama 1-2 minggu atau disimpan pada suhu -20°C untuk waktu yang lama.

[Lampiran]Skema yang Direkomendasikan untuk Pemilihan Dua Sisi

Jika pemilihan putaran ganda diperlukan, kami menyediakan skema berikut untuk memilih volume manik magnetik yang sesuai dengan ukuran perpustakaan yang diharapkan.Pemilihan ukuran dapat dilakukan sebelum perbaikan akhir atau setelah amplifikasi.Dua atau lebih pemilihan putaran ganda akan sangat mengurangi hasil perpustakaan.

Isi volume pustaka pada tabel di bawah ini hingga 100 μl.Pilih volume manik-manik magnet dalam dua putaran sesuai dengan ukuran perpustakaan yang diharapkan.Dan lakukan operasi pemilihan sesuai dengan instruksi berikut.

Tabel 5 Jumlah Manik Magnetik yang Direkomendasikan untuk Seleksi Putaran Ganda

Ukuran Pustaka yang Diharapkan 150bp 200bp 250bp 300bp 400bp 500bp 600bp 700bp
Volume Manik-manik (μl) Ronde 1 100 90 80 70 60 55 50 45
Ronde 2 30 20 20 20 20 15 15 15

1. Isi volume perpustakaan hingga 100 μl dalam tabung PCR 200μl dan beri label sebagai A. Tambahkan volume tertentu manik-manik Magnetik sesuai Tabel 5 (Putaran 1) ke tabung A. Tiup perlahan dengan pipet selama 30 detik.Inkubasi sampel selama 5 menit pada suhu kamar.

2. Tempatkan tabung A pada rak magnet yang sesuai untuk memisahkan manik-manik dari supernatan.Saat larutan jernih, pindahkan supernatan dengan hati-hati ke tabung baru dan beri label sebagai B. Buang manik-manik.

3. Tambahkan manik-manik Magnetik dengan volume tertentu sesuai Tabel 5 (Putaran 2) ke tabung B. Tiup perlahan dengan pipet selama 30 detik.Inkubasi sampel selama 5 menit pada suhu kamar.Tempatkan tabung B pada rak magnetik.Ketika solusinya jelas, lepaskan dan buang supernatan dengan hati-hati.

4. Tambahkan 200 μl 80% etanol segar ke dalam tabung B saat berada di rak magnet.Inkubasi pada suhu kamar selama 30 detik, lalu lepaskan dan buang supernatan dengan hati-hati (jangan ganggu manik-manik).

5. Ulangi Langkah 6 sekali untuk total dua kali pencucian.

Catatan: Pastikan untuk menghilangkan semua cairan yang terlihat setelah pencucian kedua.

6. Keringkan manik-manik dengan udara sampai permukaan manik-manik magnet tidak memiliki kilau yang jelas saat tabung B berada di rak magnet dengan tutup terbuka.

Catatan: Jangan mengeringkan manik-manik secara berlebihan, hal ini dapat mengakibatkan pemulihan DNA yang lebih rendah.Saat manik-manik mulai retak, artinya terlalu kering.

7. Lepaskan tabung B dari rak magnet.Tambahkan 22 μl buffer elusi ke dalam tabung.Aduk rata dengan memipetkan ke atas dan ke bawah setidaknya 10 kali atau pada vortex mixer selama 30 detik.Inkubasi selama 3-5 menit pada suhu kamar.

Catatan: Jika tangkapan yang ditargetkan tidak akan dilakukan, tambahkan buffer elusi (10mM Tris-HCl, ph 8.0-8.5) untuk elusi.Jika tidak, air ultra murni yang disterilkan harus digunakan untuk elusi.

  • Tempatkan tabung B pada rak magnetik.Pindahkan 20 μl supernatan ke tabung baru.

 

Hanya Untuk Penelitian

GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI 0

GDSBio Merupakan perusahaan teknologi tinggi yang berfokus pada penelitian dan pengembangan, produksi, dan penjualan produk ilmu hayati berkualitas tinggi.Perusahaan ini memiliki lini produk yang lengkap, dengan teknologi PCR sebagai intinya, berfokus pada PCR umum, PCR kuantitatif fluoresensi, penyimpanan NGS, elektroforesis asam nukleat dan teknologi biologi molekuler lainnya, dan telah mengembangkan reagen penelitian molekuler, bahan mentah diagnostik in vitro molekuler, ekstraksi asam nukleat dan reagen deteksi dan produk lainnya.

GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI 1GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI 2

 

Ingin Tahu lebih detail tentang produk ini
GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit untuk MGI bisakah Anda mengirimkan saya lebih banyak detail seperti jenis, ukuran, jumlah, bahan, dll.
Terima kasih!
Menunggu jawaban Anda.